AP-MN-P-500
            
质粒小量制备试剂盒
            
500次
        
        

            
AP-MN-P-250
            
质粒小量制备试剂盒
            
250次
        
        

            
AP-MN-P-50
            
质粒小量制备试剂盒
            
50次
        
    


    

        

            
AxyPrep 质粒DNA小量试剂盒
        
        

            

        
    


    本试剂盒采用改进的SDS 碱裂解法，结合DNA 制备膜选择性地吸附DNA 的方法达到快速纯化质粒DNA 的目的。适合于从1-4 ml 细菌培养物中提取多至20 μg 高纯的质粒DNA，用于测序、体外转录与翻译、限制性内切酶消化、细菌转化等分子生物学实验。

 
一、试剂盒组成、贮存、稳定性

 
说明书，耗材：DNA 制备管，2 ml 离心管，1.5 ml 离心管。

 
RNase A：50 mg/ml，室温保存。

 
Buffer S1：细菌悬浮液。加入RNase A 后，4°C 贮存。

 
Buffer S2： 细菌裂解液，室温密闭贮存。(若出现沉淀，应于37°C 温浴溶解并冷却至室温后再使用。）

 
Buffer S3：中和液，室温密闭贮存。

 
Buffer W1：洗涤液，室温密闭贮存。

 
Buffer W2 concentrate：去盐液。使用前，根据瓶上数量加入乙醇，混合均匀，室温密闭贮存。可用100乙醇或95乙醇。

 
Eluent：2.5 mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭贮存。

 
二、注意事项

 
Buffer S2、Buffer S3和Buffer W1含刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套和眼镜，避免沾染皮肤、眼睛和衣服，谨防吸入口鼻。若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医疗咨询。

 
三、实验准备

 
1. 第一次使用前，RNase A全部加入Buffer S1 中，4°C贮存。

 
2. 准备无核酸和核酸酶污染的Tip头、离心管。

 
3. 第一次使用前，Buffer W2 concentrate中加入指定体积的无水乙醇。

 
四、操作步骤

 
第一次使用时，将试剂盒携带的RNase A全部加入到Buffer S1 中，混合均匀，4°C保存。

 
1. 取1-4 ml 在LB 培养基中培养过夜的菌液（若使用丰富培养基，菌液体积应减半或更少），12,000×g 离心1 min，弃尽上清。

 
2. 用250 μl 已加入RNase A 的Buffer S1 悬浮细菌沉淀，悬浮需均匀，不应留有小的菌块。

 
3. 加入250 μl Buffer S2，温和并充分地上下翻转混合4-6 次均匀使菌体充分裂解，直至形成透亮的溶液。此步骤不宜超过5 min。

 
4. 加入350 μl Buffer S3，温和并充分地上下翻转混合6-8 次，12,000×g 离心10 min。

 
步骤5～7 可以选择负压法或离心法纯化质粒DNA。

 
A. 负压法

 
5A. 将质粒DNA 制备管插到负压装置的接口上。吸取步骤4 中的离心上清并转移到制备管中，开启并调节负压至-20-30 英寸*柱，缓慢吸走管中溶液。

 
6A. 加500 μl Buffer W1，吸尽管中溶液。

 
7A. 加700 μl Buffer W2，吸尽管中溶液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。

 
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

 
B. 离心法

 
5B. 吸取步骤4 中的离心上清并转移到DNA 制备管（置于2 ml 离心管中），12,000×g 离心1 min。

 
6B. 将制备管置回离心管，加500 μl Buffer W1，12,000×g 离心1 min，弃滤液。

 
7B. 将制备管置回离心管，加700 μl Buffer W2，12,000×g 离心1 min， 弃滤液；以同样的方法再用700 μl Buffer W2 洗涤一次。弃滤液。

 
* 确认在Buffer W2 concentrate 中已按试剂瓶上的指定体积加入无水乙醇。

 
8. 将制备管置回2 ml 离心管中，12,000×g 离心1 min。

 
9. 将制备管移入新的1.5 ml 离心管中，在DNA 制备膜正中央加60-80 μl 水或Eluent，室温静置1 min。12,000×g 离心1 min。